高效液相色譜法包括正相色譜和反相色譜兩種，用于分離、定量、鑒定和分析化學或生物樣品的成分。然而，這兩種方法彼此之間有很大的不同，在大多數情況下反相HPLC是更好的選擇。

在正相HPLC中，樣品的分離是通過在固定相中使用親水性基團（容易溶于水或被水吸收）來完成的，使極性成分最后被分離出來。在這種情況下，固定相是極性的，而流動相是非極性的。

在反相HPLC中正好相反。首先需要去除極性成分，并且在固定相中使用親脂性基團（可以溶解在脂質、脂肪、油和非極性溶劑中）。在這種情況下，固定相是非極性的，流動相是極性的。

反相HPLC的優勢

反相HPLC可以在流動相中使用水或水性溶劑。與正相HPLC相比，具有以下幾點優勢：

? 與其他HPLC方法相比，成本更低

? 溶劑毒性較低，對環境的危害較小

? 獲得準確結果的同時，需要更小的樣本量

? 減少溶劑蒸發

? 可以通過調節pH值，改善樣品分離的能力

? 固定相可以保留大多數的有機分子

? 降低分析物保留時間偏移情況的出現

? 提高梯度分離的準確性

除此之外，使用反相HPLC還有另一個顯著優勢。由于使用疏水性的固定相，反相HPLC有分析含有極性(親水)，非極性(疏水)，離子和可電離化合物樣品的能力。

這些化合物在許多方面具有相似性，用其他方法可能難以分離。反相HPLC可以準確分析這些特征相似的物質從而顯著提高了該方法所適用的樣品類型的靈活性。

然而，任何事物都會有它的缺點，反相HPLC的缺點是：

? 需要不斷提升分離技術及能力

? 難以分析胺和水不溶性化合物

? 需要提升系統耐壓能力

? pH值大于7.5時硅膠會溶解

? 無法回收洗脫的樣品

? 需要使用其他方法來識別分析物

盡管存在這些缺點，但是因為具有廣泛的適用性，且易于重現，反相HPLC依然是常用的分離技術之一。